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羊驼免疫后如何检测血清效价？

1989年比利时布鲁塞尔自由大学的免疫学家Hamers-Casterman等纯化骆驼血清时，在protein G和protein A不同洗脱条件下意外地实现了传统抗体和重链抗体（Heavy-chain antibodies ，HCAbs）的分离。

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图1.骆驼血清纯化及电泳分析：protein G上pH3.5洗脱物（lane1）、protein A上pH4.5洗脱物（lane3）即为重链抗体（HCAbs）

1993年Hamers在《nature》杂志中公开发表文章在骆驼科动物外周血液中存在一种天然缺失轻链，只包含重链可变区（VHH）和重链CH2与CH3区抗体，并将这种特殊结构的抗体称为重链抗体（ heavy-chain antibodies HCAbs ）。这类抗体存在于亚洲的西亚骆驼（Camelus bactrianus）、非洲的单峰驼（C.dromedarius）和南美的大羊驼（Lama glama）、原驼（L.guanicoe）、羊驼（Vicugna pacos）和小羊驼（V.vicugna）等骆驼科中。


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图2. 骆驼科IgG抗体亚型


骆驼科IgG抗体亚型
根据铰链区的不同我们可以将骆驼科的抗体分为如下亚型：
其中IgG2与IgG3 属于单域重链抗体，三种动物体内抗体亚型分别如下，
Alpaca：IgG1a，IgG1b，IgG2b，IgG2C
Llama：IgG1a，IgG1b，IgG2b，IgG2C
Camel：IgG1a，IgG1b，IgG2a，IgG2c，IgG3

血清效价检测

常规免疫血清效价检测大家常用：

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检测血清total IgG的免疫反应，以上三种二抗基本可以满足绝大多数情况下的用于检测免疫反应的要求。但是还是会有很多小伙伴会遇到各种问题。
1. 如果手上只有以上一种二抗，是否也可以用于其他两种物种的血清检测？
由于Camel，Alpaca，llama 抗体Fc高度同源，且又是多抗血清，可以相互通用。
2.采用Anti-Alpaca IgG(H+L), AlpHcAbs® Goat antibody(HRP) （Code: 053-404-005） 检测带Fc标签的抗原时，背景非常高，怎么解决呢？
053-404-005 制备方法是先采用纯化的Alpaca IgG 免疫山羊（Goat），再采用Alpaca IgG亲和纯化柱进行亲和纯化而获得，没有经过其他物种IgG进行交叉纯化，去除非特异。因此如果您的检测抗原带Fc标签时会有非常高的背景信号，我们建议您检测时换其他标签的抗原，可以很好的解决这个问题。
在053-404-005基础上，我们经过交叉纯化，推出了Anti-Alpaca IgG(H+L), AlpHcAbs® Goat antibody plus （Code: 053-405-005），不会与常见的human，mouse 与rabbit Fc 有交叉反应，不需要更换检测抗原。
3. Anti-Alpaca IgG(H+L), AlpHcAbs® Goat antibody(HRP) （Code: 053-404-005）是否可以检测纯化的VHH蛋白？
由于053-404-005 制备方法是先采用纯化的Alpaca Total IgG 免疫山羊（Goat），再采用Alpaca IgG亲和纯化柱进行亲和纯化而获得，因此也可以直接检测纯化的VHHs蛋白。
4.由于单域抗体只占血清中IgG的一部分，有没有方法直接只检测血清中单域抗体的titer呢？
为了只检测血清中单域抗体的titer，我们特别开发了Anti-Alpaca IgG2b+2c, AlpHcAbs® Rabbit antibody(HRP) （Code: 053-206-005），此二抗只会识别血清Alpaca Ig2b+2c的Fc端，具有高亲和力。同时我们也开发了Anti-VHH, AlpHcAbs® Rabbit antibody(HRP) （Code: 077-201-005），此抗体只识别血清中或者表达纯化的VHH抗体，不会与human IgG等结合。
5.哪种情况下需要检测血清中单域抗体的血清titer呢？
由于单域抗体对线性表位识别较差，因此在筛选小分子或者多肽纳米抗体时强烈建议需要检测血清中的单域抗体血清titer。如果是蛋白类抗原，一般情况下total IgG的血清titer与单域抗体的血清titer成正相关，不需要特别检测单域抗体的titer。
6.在用Anti-Alpaca IgG2b+2c, AlpHcAbs® Rabbit antibody(HRP) （Code: 053-206-005） Anti-VHH, AlpHcAbs® Rabbit antibody(HRP) （Code: 077-201-005）检测血清时titer特别低,是什么原因呢？
由于单域抗体在Alpaca与llama total IgG 只占一半，IgG1 会在血清检测中会竞争干扰，导致检测的单域抗体titer特别低，因此建议可以通过protein A 与G纯化出单域抗体后再检测。其次我们也在积极开发针对IgG1的亲和力纯化柱，直接抓取IgG1后再检测。
7.有没有可以用于流式检测的二抗呢？
Anti-Alpaca IgG(H+L), AlpHcAbs® Goat antibody(FITC) （Code: 053-404-006） 可以满足流式血清检测。
如果大家还有什么问题，可以在后台留言，我们将为您解答疑问。


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